基于CRISPR-Cas9系统的三阴性乳腺癌耐药基因筛选与功能验证

摘要

三阴性乳腺癌因其缺乏雌激素受体、孕激素受体及HER2表达，临床治疗选择有限，化疗耐药问题突出。本研究基于CRISPR-Cas9全基因组敲除文库，构建稳定转染的MDA-MB-231耐药细胞模型，在紫杉醇压力下开展多轮筛选，结合深度测序与生物信息学分析，鉴定出12个显著富集的潜在耐药调控基因。通过单基因敲除验证，确认SLC25A17、EIF4A2和RPL13A三个基因缺失可显著提升细胞存活率并降低凋亡水平；进一步功能实验表明，SLC25A17敲除导致线粒体膜电位下降与活性氧积累，提示其通过调控线粒体稳态参与耐药形成。该结果为三阴性乳腺癌耐药机制解析与靶向干预提供了新的分子依据。