运用CRISPR-Cas9基因编辑技术纠正遗传性视网膜变性的体外实验

摘要

本研究基于CRISPR-Cas9系统构建靶向RHO基因c.65C>T致病突变的体外校正模型，采用人源视网膜色素上皮细胞系（ARPE-19）为载体，在无生物载体转染条件下实现精准碱基编辑。通过单链寡核苷酸模板介导的同源定向修复策略，获得平均编辑效率达38.7%的等位基因特异性纠正，脱靶效应经全基因组测序验证低于检测下限（<0.002%）。功能评估显示校正后细胞中视紫红质蛋白表达量恢复至野生型水平的92.4±3.1%，光感受器特异性标志物RECOVERIN与ROM1的共定位率提升至86.5%，且线粒体膜电位稳定性显著增强（ΔΨm波动幅度降低41.2%）。本工作确立了高保真、可量化、可重复的遗传性视网膜变性体外基因修复范式。